[Страница 4/24] - Инструкция: Разное LEICA HER2 FISH System

Инструкция для LEICA HER2 FISH System - 30 Test

(скачивание инструкции бесплатно)

Формат файла: PDF

Доступность: Бесплатно как и все руководства на сайте. Без регистрации и SMS.

Дополнительно: Чтение инструкции онлайн

Pу

сский

Стр. 4 из 24

Pу

сский

Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Инструкции по использованию TA9217 RU-CE-Rev_D 11/11/2013

карциномах груди сохраняются. В грудных опухолях также часто встречаются аберрации в

17-й хромосоме по количеству копий гена (аневсомия). Они могут быть в виде пропадания

(делеций) или увеличения хромосом (полисомия). Эти хромосомные изменения решающим

образом влияют на интерпретацию состояния усиления гена HER2. Поэтому крайне важным

становится измерение количества копий 17-й хромосомы в увязке с HER2 (4).
Leica HER2 FISH System - 30 Test содержит ДНК-зонд (меченый изотопом фрагмент

ДНК) LSI HER2, непосредственно маркируемый флуоресцентный ДНК-зонд 226 Kb

SpectrumOrange

™

, специфичный для местоположения гена HER2 (17q11.2-q12) и

ДНК-зонд CEP17, непосредственно маркируемый флуоресцентный ДНК-зонд 5.4 Kb

SpectrumGreen

™

, специфичный для альфа-сателлитной последовательности ДНК в

кинетохорной области 17-й хромосомы (17p11.1-q11.1). Зондовый метод был специально

разработан и одобрен для использования в системе Leica BOND-MAX система и BOND-III

системы и его не следует модифицировать или использовать в ручной настройке.

Обзор клинической конкордантности Leica BOND-MAX System

Leica HER2 FISH System - 30 Test был разработан для обеспечения полностью

автоматизированной альтернативы действующим методам, используемым для

определения состояния усиления гена HER2. Поведение Leica HER2 FISH System -

30 Test на Leica BOND-MAX System было оценено в независимом исследовании, где

сравнивались результаты Leica HER2 FISH System - 30 Test с методом Abbott Molecular

PathVysion

HER-2 с ДНК-зондом на 300 образцов грудной опухоли. Ни один из этих

образцов не был получен от пациентов в рамках клинических исследований Herceptin.

Результаты показали конкордантность 99,33% в анализе 2x2 (доверительные интервалы

95% из 97,61–99,92%). Конкордантность также показывает, что положительный результат в

Leica HER2 FISH System - 30 Test с высокой вероятностью соответствует положительному

результату в анализе Abbott Molecular PathVysion HER-2 DNA Probe Kit. Leica HER2 FISH

System - 30 Test интерпретируется как отрицательный результат по усилению гена HER2

при коэффициенте гена HER2:CEP17 меньше 2.0, и как положительный при коэффициенте

гена HER2:CEP17 больше либо равном 2.0. Неопределенный (пограничный) результат

получается при коэффициенте усиления гена HER2:CEP17 1.8–2.2, интерпретация здесь

должна быть осторожной. Добавьте еще 20 ядер и пересчитайте коэффициент.

Обзор клинической конкордантности Leica BOND-III System

Leica HER2 FISH System - 30 Test был разработан для обеспечения полностью

автоматизированной альтернативы действующим методам, используемым для

определения состояния усиления гена HER2. Поведение Leica HER2 FISH System - 30 Test

на Leica BOND-III System было оценено в независимом исследовании, где сравнивались

результаты Leica HER2 FISH System - 30 Test с анализом Abbott Molecular PathVysion

HER-2 DNA Probe Kit на 300 образцов грудной опухоли. Ни один из этих образцов не

был получен от пациентов в рамках клинических исследований Herceptin. Результаты

показали конкордантность 99,67% в анализе 2x2 (доверительные интервалы 95% из

98,16–99,99%). Конкордантность также показывает, что положительный результат в Leica

HER2 FISH System - 30 Test с высокой вероятностью соответствует положительному

результату в анализе Abbott Molecular PathVysion HER-2 DNA Probe Kit. Leica HER2 FISH

System - 30 Test интерпретируется как отрицательный результат по усилению гена HER2

при коэффициенте гена HER2:CEP17 меньше 2.0, и как положительный при коэффициенте

гена HER2:CEP17 больше либо равном 2.0. Неопределенный (пограничный) результат

получается при коэффициенте усиления гена HER2:CEP17 1.8–2.2, интерпретация здесь

должна быть осторожной. Добавьте еще 20 ядер и пересчитайте коэффициент.

Принцип процедуры

Leica HER2 FISH System - 30 Test содержит компоненты, необходимые для выполнения

флуоресцентной гибридизации

in situ

(FISH) на основе окрашивания тканей, фиксированных

формалином и пропитанных парафином. После соответствующей предварительной

обработки, инкубации в готовом LSI HER2/CEP17 Dual Probe и достаточно тщательной

промывки секции ткани обезвоживаются и располагаются на предметных стеклах с

помощью DAPI. Результаты интерпретируются путем флуоресцентной микроскопии с

помощью рекомендуемых фильтров при подходящих длинах волн.

Leica HER2 FISH System - 30 Test предназначен только для использования на системе Leica

Biosystems BOND-MAX система и BOND-III системы.

Оглавление инструкции

Страница 1 из 25
Pусский Leica HER2 FISH System - 30 Test Инструкции по использованию Для использования на системе Leica Biosystems BOND-MAX система и BOND-III системы. TA9217 представляет собой гибридизационный продукт для локальной флуоресценции, рассчитанный на окрашивание 30 исследований (30 предметных стекол,
Страница 2 из 25
Использование по назначению...............................................................................................................................................3 Для диагностики in
Страница 3 из 25
Pусский Использование по назначению Для диагностики in vitro Leica HER2 FISH System - 30 Test предназначен для определения усиления гена HER2/ neu через флуоресцентную гибридизацию in situ (FISH) в образцах ткани рака груди, фиксированных формалином и пропитанных парафином. Leica HER2 FISH System -
Страница 4 из 25
Leica HER2 FISH System - 30 Test содержит ДНК-зонд (меченый изотопом фрагмент ДНК) LSI HER2, непосредственно маркируемый флуоресцентный ДНК-зонд 226 Kb SpectrumOrange™, специфичный для местоположения гена HER2 (17q11.2-q12) и ДНК-зонд CEP17, непосредственно маркируемый флуоресцентный ДНК-зонд 5.4
Страница 5 из 25
Pусский Предоставляемые компоненты Перечисленных ниже материалов (Taблица 1) достаточно для окрашивания 30 исследований (30 предметных стекол, окрашенных с помощью LSI HER2/CEP17 Dual Probe). LSI HER2/CEP17 Probe Содержит готовый LSI HER2/CEP17 Dual Probe. 6,6 mL Содержит <60% (v/v) формамида. Post
Страница 6 из 25
Только для профессиональных пользователей. Один или несколько компонентов в продукте опасны и могут нанести вред неродившемуся ребенку. Как правило, лица моложе 18 лет не допускаются к работе с этим продуктом. Пользователи должны быть тщательно проинструктированы о порядке работы, опасных свойствах
Страница 7 из 25
Pусский C. Методология • Перед применением этой методологии пользователи должны быть должным образом обучены технологии автоматизированной флуоресцентной гибридизации in situ. • Каждая секция ткани, окрашенная с помощью LSI HER2/CEP17 Dual Probe, позволяет провести одинаковый клеточный анализ и
Страница 8 из 25
G. Хранение предметных стекол Храните окрашенные предметные стекла при –20 °C в темном месте. Разрешить слайды до комнатной температуры до просмотра после извлечения из –20 °C. Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Инструкции по использованию TA9217 RU-CE-Rev_D 11/11/2013 Стр. 8 из 24
Страница 9 из 25
Pусский Оценка и подсчет количества сигналов Для оценки качества сигналов и подсчет количества сигналов HER2 и CEP17 проделайте следующее: 1. Оценка качества предметных стекол Оцените качество предметных стекол по следующим критериям: 1. Оценка качества предметных стекол - Интенсивность сигнала
Страница 10 из 25
Для определения соотношения LSI HER2 и CEP17 используйте следующий метод: 1. Зафиксируйте и определите количество сигналов LSI HER2 и CEP17 в 20 ядрах (см. рис. 2 «Подсчет сигналов Leica HER2 FISH System - 30 Test» внизу). 2. Суммируйте все сигналы LSI HER2. Это будет сумма сигналов LSI HER2 для
Страница 11 из 25
Pусский Leica HER2 FISH System - 30 Test Руководство по интерпретации результатов Считайте как 2 оранжевых сигнала и 1 зеленый сигнал Не считайте. Ядра без сигналов или с сигналами только одного цвета не следует засчитывать. Засчитывайте только ядра с одним или более FISH-сигналами каждого цвета.
Страница 12 из 25
20 ядер, подсчет сигналов Ядро № HER2 Номер копии CEP17 Номер копии Ядро № 1 11 2 12 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 18 9 19 10 20 Всего 1-10 Всего 11-20 HER2 CEP17 HER2 Номер копии CEP17 Номер копии HER2:CEP17 коэффициент усиления Общий счет 1-20 В среднем на одну клетку Рисунок 2: Пример ведомости
Страница 13 из 25
Pусский Контроль качества Использование контрольных предметных стекол Рекомендуется включать по одному Leica HER2 FISH Control Slides в каждую исследуемую серию для контроля характеристик анализируемых образцов и оценки точности подсчета сигналов. Контрольные предметные стекла должны включаться в
Страница 14 из 25
Неспецифическое окрашивание из-за несвязанного зонда имеет разрозненный, зернистый вид и его можно наблюдать в ожидаемом месте гибридизации или на расстоянии от него. Для интерпретации результатов окрашивания используйте неповрежденные клетки. Омертвевшие или дегенерированные клетки могут
Страница 15 из 25
Pусский ткани инвазивной карциномы груди с известной выраженностью онкогенного белка HER2. Была выбрана и равномерно распределена в каждой лаборатории когорта из 300 образцов, из них 75 ранее охарактеризованных иммуногистохимических случаев на 0/1+, 150 ранее охарактеризованных
Страница 16 из 25
Данные были сгруппированы как отрицательные (<2.00) или положительные (≥2.00) для анализа 2x2. Наблюдаемая согласованность у 300 образцов между двумя исследованиями в анализе 2x2 показывает конкордантность 99,67% (299/300) с ДИ 95% из 98,16–99,99% для Leica BOND-III System. Процент положительного
Страница 17 из 25
Pусский Проверка точности – Leica BOND-MAX System A. Внутрисерийная проверка точности Внутрисерийная проверка точности была выполнена методом случайной выборки. Внутрисерийная точность Leica HER2 FISH System - 30 Test оценивалась в одной лаборатории на 540 ранее охарактеризованных образцах HER2 TMA
Страница 18 из 25
Проверка точности от партии к партии была выполнена методом случайной выборки. Точность от партии к партии определялась на трех партиях Leica HER2 FISH System - 30 Test, независимо изготовленных с применением зарекомендовавших себя технологий (GMP). Каждая партия испытывалась в одной лаборатории на
Страница 19 из 25
Pусский При исчислении предметных стекол, окрашенных при межлабораторной проверке точности, 511/513 оцененных случаев показали конкордантный результат с общей конкордантностью 99,61% с более низким 95% ДИ – 98,60%. K. Межнаблюдательная проверка точности Межнаблюдательная проверка точности была
Страница 20 из 25
Операции, выполненные за пределами рекомендуемых параметров надежности анализа, не прошли валидацию. Использование любых других параметров исследований может отменить валидацию анализа. Приведенный выше текст описывает протестированные условия и результаты этого исследования. Обратите внимание, что
Страница 21 из 25
Pусский Поиск и устранение неисправностей Проблема Отсутствует или очень слаб флуоресцентный сигнал / окрашивание Вероятная причина Неправильная фиксация или обработка исследуемого образца Должен использоваться фиксаж на основе формалина, а графики обработки должны быть пригодны для исследуемого
Страница 22 из 25
Неспецифический фоновый флуоресцентный сигнал / окрашивание Плохое сохранение морфологии ткани От предметных стекол пациента / контрольных предметных стекол отрывается ткань Вероятная причина Способ устранения Недостаточная послегибридизационная промывка Увеличьте время послегибридизационной
Страница 23 из 25
Pусский Справочный материал 1. Bargmann CI, Hung MC, Weinberg RA. The neu oncogene encodes an epidermal growth factor related protein. Nature 1986;319:226–30. 2. Lonardo F, Di Marco E, King CR, Pierce JH, Segatto O, Aaronson SA, et al. The normal erbB2 product is an atypical receptor-like tyrosine
Страница 24 из 25
Данный продукт содержит FISH-пробы PathVysion, предоставленные Abbott Molecular Inc. PathVysion, LSI и CEP являются торговыми марками Abbott Molecular Inc. Все права защищены. Используется по лицензии. Изменения и дополнения к предыдущему изданию Наименование продукции, информационного спонсора,
Страница 25 из 25

Инструкция для LEICA HER2 FISH System - 30 Test

Инструкции и руководства похожие на LEICA HER2 FISH System - 30 Test

Другие инструкции и руководства из категории Разное