[Страница 8/24] - Руководство пользователя: Разное LEICA HER2 FISH System

Инструкция для LEICA HER2 FISH System - 30 Test

(скачивание инструкции бесплатно)

Формат файла: PDF

Доступность: Бесплатно как и все руководства на сайте. Без регистрации и SMS.

Дополнительно: Чтение инструкции онлайн

Pу

сский

Стр. 8 из 24

Pу

сский

Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Инструкции по использованию TA9217 RU-CE-Rev_D 11/11/2013

7. У нового комплекта Leica HER2 FISH System - 30 Test просканируйте штрихкод

лотка с реактивами ручным сканером, чтобы войти в каталог реактивов Leica

BOND (только один штрихкод).

8. Подготовьте Leica BOND Enzyme 5 в прилагаемой открытой емкости Leica BOND

с разбавлением 1:300. Например, для 10 предметных стекол налейте 10 µl

Leica BOND Enzyme Concentrate 2 на 2990 µl Leica BOND Enzyme Diluent.

9. Просканируйте прилагаемую открытую емкость Leica BOND и зарегистрируйте как

Bond Enzyme 5

10. Перейдите в окно настроек предметного стекла и щелкните на

Add case (Добавить

пациента)

11. Введите данные для первого пациента. Убедитесь, что объем раздачи установлен

на

150

, а протокол подготовки – на

*Dewax (Депарафинизация)

. Щелкните на

12. Когда пациент выделится в окне настроек предметного стекла, щелкните

Add slide

(Добавить предметное стекло)

13. Сначала добавьте исследуемые предметные стекла пациента. Убедитесь, что тип

ткани установлен на

Test tissue (Исследуемая ткань)

14. Выберите режим окрашивания

Single (Одиночный)

15. Выберите процесс

ISH

16. В списке проб выберите

*LSI HER2/CEP17 Dual Probe – 30 Test

. На вкладке «Протоколы»

(Protocols) по умолчанию будет значиться правильный протокол окрашивания (

*FISH

Protocol A

), протокол HIER (

*HIER 25 min with ER1

(97)

), протокол EIER (

*Enzyme 5 for 25 min

денатурирование (

*D10

) и гибридизация (

*ISH Hybridization (12Hr)

17. Повторяйте шаги 10–16, пока не будут созданы исследуемые предметные стекла

пациента и средства контроля (контрольные предметные стекла Leica HER2

FISH и/или внутрилабораторные средства контроля). Распечатайте наклейки для

предметных стекол.

18. Наклейте наклейки на предметные стекла .
19. Откройте крышки всех емкостей Leica HER2 FISH System - 30 Test и загрузите

лоток с реактивом в систему Leica BOND-MAX и BOND-III.

20. На каждое предметное стекло положите новые Covertiles.
21. Загрузите контейнер с предметными стеклами в систему Leica BOND-MAX и

BOND-III и нажмите кнопку

Load/Unload (Загрузка/разгрузка)

22. Убедитесь, что предметные стекла просканированы и щелкните на кнопке

Run (Play)

(Серия)

в окне

System status

(

Состояние системы)

, чтобы немедленно начать окрашивание

(для Leica HER2 FISH System - 30 Test рекомендуется проводить этот анализ в

течение ночи с использованием функции отложенного запуска).

23. Убедитесь, что в поле индикатора контейнера отображается

Proc (OK)

, номер партии

и время завершения.

24. По окончании серии нажмите кнопку

Load/Unload (Загрузка/разгрузка)

и выньте контейнер

с предметными стеклами из Leica BOND-MAX система и BOND-III системы.

25.  Снимите Covertiles и промойте предметные стекла в деионизированной воде.
26.  Быстро обезвожьте двумя сменами спирта, просушите воздухом.
27.  Нанесите 20 µl DAPI прямо на образец.
28.  Положите покровное стекло и дайте раствору полностью распределиться, удалите

все пузырьки воздуха.

29. Обмажьте края покровного стекла лаком для ногтей или аналогичным герметиком.
30. Положите предметные стекла в темное место, чтобы обеспечить формирование

сигнала перед просмотром под флуоресцентным микроскопом.

31. Для сохранения интенсивности сигнала храните окрашенные предметные стекла при –20 °C.

G. Хранение предметных стекол

Храните окрашенные предметные стекла при –20 °C в темном месте. Разрешить

слайды до комнатной температуры до просмотра после извлечения из –20 °C.

Оглавление инструкции

Страница 1 из 25
Pусский Leica HER2 FISH System - 30 Test Инструкции по использованию Для использования на системе Leica Biosystems BOND-MAX система и BOND-III системы. TA9217 представляет собой гибридизационный продукт для локальной флуоресценции, рассчитанный на окрашивание 30 исследований (30 предметных стекол,
Страница 2 из 25
Использование по назначению...............................................................................................................................................3 Для диагностики in
Страница 3 из 25
Pусский Использование по назначению Для диагностики in vitro Leica HER2 FISH System - 30 Test предназначен для определения усиления гена HER2/ neu через флуоресцентную гибридизацию in situ (FISH) в образцах ткани рака груди, фиксированных формалином и пропитанных парафином. Leica HER2 FISH System -
Страница 4 из 25
Leica HER2 FISH System - 30 Test содержит ДНК-зонд (меченый изотопом фрагмент ДНК) LSI HER2, непосредственно маркируемый флуоресцентный ДНК-зонд 226 Kb SpectrumOrange™, специфичный для местоположения гена HER2 (17q11.2-q12) и ДНК-зонд CEP17, непосредственно маркируемый флуоресцентный ДНК-зонд 5.4
Страница 5 из 25
Pусский Предоставляемые компоненты Перечисленных ниже материалов (Taблица 1) достаточно для окрашивания 30 исследований (30 предметных стекол, окрашенных с помощью LSI HER2/CEP17 Dual Probe). LSI HER2/CEP17 Probe Содержит готовый LSI HER2/CEP17 Dual Probe. 6,6 mL Содержит <60% (v/v) формамида. Post
Страница 6 из 25
Только для профессиональных пользователей. Один или несколько компонентов в продукте опасны и могут нанести вред неродившемуся ребенку. Как правило, лица моложе 18 лет не допускаются к работе с этим продуктом. Пользователи должны быть тщательно проинструктированы о порядке работы, опасных свойствах
Страница 7 из 25
Pусский C. Методология • Перед применением этой методологии пользователи должны быть должным образом обучены технологии автоматизированной флуоресцентной гибридизации in situ. • Каждая секция ткани, окрашенная с помощью LSI HER2/CEP17 Dual Probe, позволяет провести одинаковый клеточный анализ и
Страница 8 из 25
G. Хранение предметных стекол Храните окрашенные предметные стекла при –20 °C в темном месте. Разрешить слайды до комнатной температуры до просмотра после извлечения из –20 °C. Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Инструкции по использованию TA9217 RU-CE-Rev_D 11/11/2013 Стр. 8 из 24
Страница 9 из 25
Pусский Оценка и подсчет количества сигналов Для оценки качества сигналов и подсчет количества сигналов HER2 и CEP17 проделайте следующее: 1. Оценка качества предметных стекол Оцените качество предметных стекол по следующим критериям: 1. Оценка качества предметных стекол - Интенсивность сигнала
Страница 10 из 25
Для определения соотношения LSI HER2 и CEP17 используйте следующий метод: 1. Зафиксируйте и определите количество сигналов LSI HER2 и CEP17 в 20 ядрах (см. рис. 2 «Подсчет сигналов Leica HER2 FISH System - 30 Test» внизу). 2. Суммируйте все сигналы LSI HER2. Это будет сумма сигналов LSI HER2 для
Страница 11 из 25
Pусский Leica HER2 FISH System - 30 Test Руководство по интерпретации результатов Считайте как 2 оранжевых сигнала и 1 зеленый сигнал Не считайте. Ядра без сигналов или с сигналами только одного цвета не следует засчитывать. Засчитывайте только ядра с одним или более FISH-сигналами каждого цвета.
Страница 12 из 25
20 ядер, подсчет сигналов Ядро № HER2 Номер копии CEP17 Номер копии Ядро № 1 11 2 12 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 18 9 19 10 20 Всего 1-10 Всего 11-20 HER2 CEP17 HER2 Номер копии CEP17 Номер копии HER2:CEP17 коэффициент усиления Общий счет 1-20 В среднем на одну клетку Рисунок 2: Пример ведомости
Страница 13 из 25
Pусский Контроль качества Использование контрольных предметных стекол Рекомендуется включать по одному Leica HER2 FISH Control Slides в каждую исследуемую серию для контроля характеристик анализируемых образцов и оценки точности подсчета сигналов. Контрольные предметные стекла должны включаться в
Страница 14 из 25
Неспецифическое окрашивание из-за несвязанного зонда имеет разрозненный, зернистый вид и его можно наблюдать в ожидаемом месте гибридизации или на расстоянии от него. Для интерпретации результатов окрашивания используйте неповрежденные клетки. Омертвевшие или дегенерированные клетки могут
Страница 15 из 25
Pусский ткани инвазивной карциномы груди с известной выраженностью онкогенного белка HER2. Была выбрана и равномерно распределена в каждой лаборатории когорта из 300 образцов, из них 75 ранее охарактеризованных иммуногистохимических случаев на 0/1+, 150 ранее охарактеризованных
Страница 16 из 25
Данные были сгруппированы как отрицательные (<2.00) или положительные (≥2.00) для анализа 2x2. Наблюдаемая согласованность у 300 образцов между двумя исследованиями в анализе 2x2 показывает конкордантность 99,67% (299/300) с ДИ 95% из 98,16–99,99% для Leica BOND-III System. Процент положительного
Страница 17 из 25
Pусский Проверка точности – Leica BOND-MAX System A. Внутрисерийная проверка точности Внутрисерийная проверка точности была выполнена методом случайной выборки. Внутрисерийная точность Leica HER2 FISH System - 30 Test оценивалась в одной лаборатории на 540 ранее охарактеризованных образцах HER2 TMA
Страница 18 из 25
Проверка точности от партии к партии была выполнена методом случайной выборки. Точность от партии к партии определялась на трех партиях Leica HER2 FISH System - 30 Test, независимо изготовленных с применением зарекомендовавших себя технологий (GMP). Каждая партия испытывалась в одной лаборатории на
Страница 19 из 25
Pусский При исчислении предметных стекол, окрашенных при межлабораторной проверке точности, 511/513 оцененных случаев показали конкордантный результат с общей конкордантностью 99,61% с более низким 95% ДИ – 98,60%. K. Межнаблюдательная проверка точности Межнаблюдательная проверка точности была
Страница 20 из 25
Операции, выполненные за пределами рекомендуемых параметров надежности анализа, не прошли валидацию. Использование любых других параметров исследований может отменить валидацию анализа. Приведенный выше текст описывает протестированные условия и результаты этого исследования. Обратите внимание, что
Страница 21 из 25
Pусский Поиск и устранение неисправностей Проблема Отсутствует или очень слаб флуоресцентный сигнал / окрашивание Вероятная причина Неправильная фиксация или обработка исследуемого образца Должен использоваться фиксаж на основе формалина, а графики обработки должны быть пригодны для исследуемого
Страница 22 из 25
Неспецифический фоновый флуоресцентный сигнал / окрашивание Плохое сохранение морфологии ткани От предметных стекол пациента / контрольных предметных стекол отрывается ткань Вероятная причина Способ устранения Недостаточная послегибридизационная промывка Увеличьте время послегибридизационной
Страница 23 из 25
Pусский Справочный материал 1. Bargmann CI, Hung MC, Weinberg RA. The neu oncogene encodes an epidermal growth factor related protein. Nature 1986;319:226–30. 2. Lonardo F, Di Marco E, King CR, Pierce JH, Segatto O, Aaronson SA, et al. The normal erbB2 product is an atypical receptor-like tyrosine
Страница 24 из 25
Данный продукт содержит FISH-пробы PathVysion, предоставленные Abbott Molecular Inc. PathVysion, LSI и CEP являются торговыми марками Abbott Molecular Inc. Все права защищены. Используется по лицензии. Изменения и дополнения к предыдущему изданию Наименование продукции, информационного спонсора,
Страница 25 из 25

Инструкция для LEICA HER2 FISH System - 30 Test

Инструкции и руководства похожие на LEICA HER2 FISH System - 30 Test

Другие инструкции и руководства из категории Разное